elisa实验原理（液相阻断ELISA的原理和步骤）

elisa实验原理（液相阻断ELISA的原理和步骤）

• 液相阻断ELISA的原理和步骤
• elisa实验原理
• elisa的原理和实验步骤
• 说明elisa的原理本次实验采用的方法与indirect elisa有何差异
• ELISA的汉语名称及实验原理
• elisa的基本原理

液相阻断ELISA其实就是将抗体（兔抗血清）包被在ELISA板中，于此同时将待检血清做几个稀释度和已知抗原在反应板中反应；4°过夜，然后将ELISA板中包被的抗体弃掉，洗板；将反应板中一定量的反应液加入ELISA板中，37°1h；然后弃液，洗板，加入一定量的一抗（豚鼠抗血清），与所剩抗原结合，37°1h；然后弃液，洗板，加入一定量的酶标二抗（兔抗豚鼠血清+酶标记物），37°1h；然后弃液，洗板，加入配好的显色液，37°显色10-20分钟左右，加入终止液读数。

原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。

ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特点。

ELISA可用于测定抗原，也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：

1、固相的抗原或抗体；

2、酶标记的抗原或抗体；

3、酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法。

扩展资料

在ELISA实验方法中，比较常见的方法有双抗体夹心法，竞争法，间接法，双抗原夹心法，捕获法。

双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。

参考资料来源： 东莞市疾病预防控制中心—常用ELISA实验原理

摘要ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。操作步骤:

1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

4．洗板5次。

5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

7．洗板5次。

8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

10．洗板5次。

11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。

咨询记录 · 回答于2021-11-25

elisa的原理和实验步骤

ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。操作步骤:

1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

4．洗板5次。

5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

7．洗板5次。

8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

10．洗板5次。

11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。

二个月后这个报告安全了吗

亲，这个的话您要去问专业人士哦

• 酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。1971年Engvall和Perlmann发表了该方法用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

• 间接法测抗体（indirect elisa）

• 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

• （1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

• （2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

• （3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

• （4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

• 本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是在免疫酶技术。ELISA的基本原理有三条：1抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；2抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

ELISA的原理：ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。

由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。这种测定方法中有3种必要的试剂：

1.? 固相的抗原或抗体；

2.? 酶标记的抗原或抗体；

3.? 酶作用的底物。

根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。