cck8用的是动力学法还是终点法
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终点法。
一、实验原理:
细胞活力检测试剂盒(CCK-8)可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。
在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。
二、用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。
三、优点:使用方便,无需洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂。
CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度。CCK-8法的重复性优于MTT法,产生的formazan是水溶性的,减少因洗涤和溶解带来的误差。
CCK-8法对细胞毒性小,可以多次测定选取最佳测定时间,与MTT方法相比线性范围更宽,灵敏度更高。
CCK-8细胞活性检测试剂无需预制,即开即用。
在CCK-8试剂盒中,最主要的化学药品是WST-8,化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。
它的核心基团和MTT是一样的,是MTT的升级版本。在电子耦合试剂(也就是细胞是活的,有呼吸,有能量代谢)存在的情况下,可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多,产生的Formazan就越多,颜色也会越深。
所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低,有些细胞在药物处理后,可能活细胞数不变,但是代谢率低了以后,细胞呼吸减弱,NAD+产生减少,测出的Formazan也会减少。
扩展资料:
CCK8的用途
1、细胞增殖测定:细胞增殖实验在很多领域都会用到,比如肿瘤相关、损伤后修复等。
2、药物筛选:在测定一个药物的毒性和安全有效浓度时,经常会用到CCK-8。
3、细胞毒性测定:这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响,比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。
没有确定的最大和最小值,
Cell Counting Kit-8(简称 CCK-8 )试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其 基本原理 为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基 苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
◆?Cell Counting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
◆?WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
◆?CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
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