cck8中od值越大说明什么
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- CCK8试剂盒推荐
- MTT实验和CCK8的区别
- cck8 培养基 比例
- cck8实验原理是什么
OD值越大说明微生物越多。
这个针对不同的菌种和不同的培养基均不同，需要自己前期做一个标准曲线。也就是用培养基为空白对照，不同生长阶段发酵液为样品测定OD值，并测定这些阶段的活菌数，此后再按照发酵时间对比标准曲线得出单位活菌数。
但是活菌的生长不完全稳定性和细菌的自然沉降都会影响实验结果，如果看趋势可以使用，如果要获得详细数据没办法还得活菌计数。
光密度（OD）
光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
《科技大辞典》对光密度的定义是：入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值。专业书籍则这样解释“吸光度”：入射光和透射光的透过率之比值的常用对数值，也称光密度。分析可见，两个概念其实是一致的，“光密度”就是“吸光度”，且用“光密度”符合国家标准，更规范。
CCK8操作说明细胞活性检测 1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。 2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。细胞增殖 -毒性检测 1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。 2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。 4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。 3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。同仁CCK8检测步骤 CCK-8 检测步骤 1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a) 2. 在37℃下预孵育培养板。b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。 4. 37℃下孵育。 5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。 6. 37℃下孵育1-4小时。e) 7. 测定450 nm处的OD值。 a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。 c) 使用培养基或PBS来制备溶液。 d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。 e) 白细胞可能需要培养较长时间。活力计算细胞活力*（％）= ×100 A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 DOJINDO CCK8 初学者问答 (同仁DOJINDO)
因为OD值越大说明微生物越多，一般2左右。
这个针对不同的菌种和不同的培养基均不同，需要自己前期做一个标准曲线。也就是用培养基为空白对照，不同生长阶段发酵液为样品测定OD值，并测定这些阶段的活菌数，此后再按照发酵时间对比标准曲线得出单位活菌数。
但是活菌的生长不完全稳定性和细菌的自然沉降都会影响实验结果，如果看趋势可以使用，如果要获得详细数据没办法还得活菌计数。
光密度（OD）
光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
《科技大辞典》对光密度的定义是：入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值。专业书籍则这样解释“吸光度”：入射光和透射光的透过率之比值的常用对数值，也称光密度。分析可见，两个概念其实是一致的，“光密度”就是“吸光度”，且用“光密度”符合国家标准，更规范。
还是比较常用的.但是因为MTT价格相对CCK-8试剂盒更便宜,实验室更较多采用MTT法.CCK-8法更灵敏,而且不用用DMSO溶解,减少接触有毒试剂的机会.96孔板培养细胞,检测时每孔加入10%培养基体积的CCK-8,在细胞培养箱中继续孵育0.5-4个小时,时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,检测波长为450nm.
CCK8，即Cell Counting Kit-8，与MTT法的主要区别如下：
一、原理不同
1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。
2、MTT法：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
二、特点不同
1、Cell Counting Kit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞；无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；适合于高通量药物筛选。
2、MTT法：特点是灵敏度高、经济。
三、应用不同
1、Cell Counting Kit-8：主要用途为药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。
2、MTT法：广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
参考资料来源：
百度百科-Cell Counting Kit-8
百度百科-MTT法
100微升培养基加10微升cck8
CCK-8试剂（Cell Counting Kit-8 细胞计数试剂 ）中含有WST_8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲_产物（Formazan），生成的甲_物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
其基本原理为：
该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。
优点
1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
2、检测快速；
3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；
4、重复性优于MTT法；
5、对细胞毒性小；
6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
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